下载文件详细资料
  文件名称:  SKD-200定氮仪的实验报告
  公司名称:  上海沛欧分析仪器有限公司
  下载次数:   1431
  文件详细说明:
 

实验目的:验证沛欧SKD-200型凯氏定氮仪对低蛋白量样品的检测准确度与精确度

实验设计人:沙金

实验执行人:沙金

实验时期2010-3-11

 

仪器与试剂

凯氏定氮仪(SKD-200,上海沛欧分析仪器有限公司)

精密分析天平(FA2004,上海精科天平厂)

通风橱

水槽

500mL三角瓶若干

25mL酸式滴定管

50mL量筒

1mL移液器与枪头

10mL离心管

药匙

称量纸

 

固体硫酸钾/硫酸铜催化剂=3:1w/w

样品10.5mg/mL BSA 2mLcontaining 50% glycerol

样品20.5 mg/mL 大豆浸提液 2mL (containing 50% glycerol

样品3:标准硫酸铵 (1mg N/mL)

空白对照:saline (containing 50% glycerol

浓硫酸(AR)

35% NaOH

2% H3BO3

混合指示剂:0.1%溴甲酚绿乙醇溶液:0.1%甲基的红乙醇溶液=5:1

0.1N NaOH

0.1N HCl

0.01037N 滴定用HCl

 

操作步骤

1.      消化:

将预先称量好的固体硫酸钾/硫酸铜催化剂粉末约6g(可适当加量)小心加入洗净干燥的消化管底部;分别将样品12和空白对照(约2mL)各两份用分析天平差减法直接倒入消化管底部,记录各组重量;用量筒小心称取浓硫酸16mL加入各消化管底部。将消化管放在管架上,放入消化炉,启动通风橱。设置消化温度时间曲线:170℃(根据样品碳化和沸腾的情况,可适当提高或降低预消化温度,并尽量避免样品碳化沸腾挂壁以提高检测准确度),30min——250℃10min——370℃(为保证消化效果,可根据情况适当提高至400℃以上),120min。当消化管内出现稳定的恒沸白色酸雾并回流时,可盖上消化管盖以减少硫酸损失。当样品被消化为明亮的蓝绿色或绿色液体时,即可停止消化,待其冷却至室温后,取出蒸馏,关闭通风橱。

 

2.      蒸馏:

向凯氏定氮仪的三个储液桶中分别加入足量的35%NaOH2%H3BO3和蒸馏水(根据处理样品量,至少1L),旋紧储液桶盖子。开机,打开循环水,不放入样品,预蒸馏2min。向样品管中小心加入20mL蒸馏水以稀释硫酸,待其变为明亮的蓝色溶液时,小心放入蒸馏架,卡紧卡槽时注意将消化样品管口卡紧以防止氨蒸气流失;向500mL接收三角瓶中加入少量(约0.6mL)混合指示剂,并设定加硼酸12s,加碱8s,蒸馏8—9min,保存设置后启动仪器。当氨蒸气随冷凝水流出时(注意氨蒸气管出口浸没于接收三角瓶的硼酸溶液中),接收瓶中的硼酸溶液会由玫红色变为蓝色,待蒸馏完毕,用蒸馏水将氨蒸气管出口的残液冲洗入接收瓶后取出待测。将样品管取出,小心倒入水槽,并及时清洗。放入下一个样品管和接收瓶,重复以上操作。蒸馏完毕后,关闭循环水。待蒸馏水冷却后放出。如短时间内不再使用定氮仪,应用蒸馏水替换酸液和碱液,重复加酸加碱过程以清洗酸碱管路,维护设备。

 

3.      滴定

0.1N NaOH0.1NHCl、蒸馏水分别润洗酸式滴定管各三次,蕞后用0.01037N滴定用标准HCl润洗两三次。加入0.01037N滴定用标准HCl,并小心放液至0刻度。开始滴定,左手控制滴定速度,右手不断摇动混匀三角瓶中溶液。(可预先对样品消耗盐酸量有一个大致的估计,即每毫升0.01N盐酸可滴定约0.14mg氮)临近滴定终点时溶液开始由蓝色变为蓝灰色,在最后一滴或半滴时微微呈现紫红色。视线与滴定管水平时读取并记录盐酸消耗量。用0.01037N滴定用标准HCl补满至0刻度后,可滴定下一个样品。

 

实验结果:

1.      各组样品取样量:

 

空白对照

BSA (0.5mg/mL)

大豆浸提液(0.5mg/mL)

取样前(g

9.823

9.191

9.702

第一次取样后(g

7.391

6.639

7.016

第二次取样后(g

4.359

4.506

4.316

第一次取样量(g

2.432

2.552

2.686

第二次取样量(g

3.032

2.133

2.700

第一次取样量(mg

0.00

1.1285

1.1878

第二次取样量(mg

0.00

0.9432

1.1940

注:甘油密度1.2613g/mL,生理盐水密度1.00 g/mL,则样品溶液密度1.1307g/mL

蛋白取样量(mg= 取样量(g/ 样品溶液密度 X 0.5 mg/mL

 

2.      各组样品消耗盐酸量:

 

空白对照

BSA (0.5mg/mL)

大豆浸提液(0.5mg/mL)

第一次取样量(g

2.432

2.552

2.686

第二次取样量(g

3.032

2.133

2.700

第一次盐酸消耗量(mL

0.40

2.04

2.36

第二次盐酸消耗量(mL

0.45

1.64

2.44

第一次滴定氮量(mg

0.058

0.296

0.343

第二次滴定氮量(mg

0.065

0.238

0.354

平均氮含量(mg/mL)

0.026

0.129

0.146

平均蛋白含量(mg/mL)

0

0.577

0.724

检测准确度

 

高于真实值15.4%

高于真实值约44.7%

检测精确度(SD%)

±7.26%

±2.75%

±1.99%

注:每消耗1mL0.01N的盐酸相当于0.14mg氮;动物胶K=5.6N=18.0%),大豆制品K=6.016.7%)。

 

讨论:

从检测结果看,当测量氮含量为0.18mg时,标准偏差控制在±3%以内,而空白对照的含氮量进一步下降为0.03mg时,标准偏差仍控制在±10%以内,实验结果重复性较为理想。但两组实验测量值均大于真值,分析原因:1BSA组高15.4%,怀疑实验场所距动物房较近,造成结果偏高。2)大豆浸提液组高44.7%,怀疑不仅有1)的原因,而且浸提液中含有较高的非蛋白氮干扰,建议将浸提蛋白沉淀后再以凯氏定氮法测量。

 

另:以标准硫酸铵检测的蒸馏回收效果,实验结果表明:当氮含量为1mg时,以1500W蒸馏器蒸馏8min,平均氮回收率为96.9%;以1500W蒸馏器蒸馏9min,平均氮回收率可达100%,蒸馏回收效果理想。建议对于低蛋白含量样品测量而言,降低蒸馏器功率,并适当延长蒸馏时间可进一步改善回收率,从而使结果重复性更好

 

 

 

 

注:作者系上海我武生物公司研发部生化博士

 

文件下载(右键文件另存为)
友情链接:大运彩票官网  盛源彩票  百分百彩票官网  欢乐彩票官网  百分百彩票  盛源彩票官网  大通彩票官网  

免责声明: 本站资料及图片来源互联网文章,本网不承担任何由内容信息所引起的争议和法律责任。所有作品版权归原创作者所有,与本站立场无关,如用户分享不慎侵犯了您的权益,请联系我们告知,我们将做删除处理!